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蝗蟲基因組DNA提取及保存方法

點(diǎn)擊次數(shù):1875 更新時(shí)間:2019-04-11

1.供試?yán)ハx本試驗(yàn)研究的昆蟲樣本為亞洲小車蝗(Oedaleusasiaticus)成蟲,均采自內(nèi)蒙古錫林郭勒盟多倫縣農(nóng)牧交錯(cuò)區(qū)草原,用養(yǎng)蟲籠活體帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理保存。

2.液氮速凍處理取10頭活的亞洲小車蝗單頭裝入離心管中,將離心管放入液氮中速凍處理3min,取出后在室溫條件下放置12h觀察亞洲小車蝗存活情況。自增壓液氮罐

3.樣本保存方法

(1)液氮速凍后保存將采集帶回實(shí)驗(yàn)室的活體蝗蟲樣本單頭裝入離心管中,將離心管放入液氮中速凍處理3min,取出后放入-40℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)直接冷凍保存將采集帶回實(shí)驗(yàn)室的活體蝗蟲樣本單頭裝入離心管中,直接放入-40℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

(3)乙醇保存將采集帶回實(shí)驗(yàn)室的活體蝗蟲樣本放入無水乙醇(分析純)中保存?zhèn)溆谩?/p>

(4)干制標(biāo)本 將采集帶回來的活體亞洲小車蝗樣本放入毒瓶中毒死后,針插保存于標(biāo)本室中,待風(fēng)干后進(jìn)行DNA提取試驗(yàn)。

4.DNA的提取將上述4種方法保存的蝗蟲樣本在3個(gè)月后進(jìn)行DNA提取試驗(yàn)。分別選用單頭亞洲小車蝗的后足股節(jié),無水乙醇(分析純)保存的蝗蟲后足股節(jié)需在提取之前先用無菌去離子水沖洗2~3次,將蝗蟲股節(jié)放入研缽中用液氮研磨成粉并移入1.5mL離心管中,然后使用天根dp304動(dòng)物基因組DNA提取試劑盒參照說明書步驟進(jìn)行基因組DNA提取。

5.DNA電泳檢測用1%的瓊脂糖凝膠電泳對提取的蝗蟲基因組DNA進(jìn)行檢測。取DNA樣品3μL、上樣緩沖液2μL混勻后加入凝膠時(shí)預(yù)留的點(diǎn)樣孔中,加入DL2000Marker(TaKaRa;第3條帶為150ng/μL),經(jīng)過100V恒壓電泳20min,使用紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察基因組DNA提取情況并拍照保存。自增壓液氮罐

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